Hoy veremos una de las múltiples utilidades dle bacteriófago Mu, en este caso como sistema para integración/amplificación de un gen de interés, en caso de bacterias Gram-negativas, en concreto nos centraremos en una muy conocida y estudiada, E. coli.
Para este trabajo son empleados lo que denominan mini-Mus, es decir, secuencias parciales de la original del virus, según su finalidad pueden ser, de transposición, replicación o empaquetamiento; otros incluso sólo poseen secuencias terminales del fago, denominadas mini-Mu(LR).
Para la síntesis de sustancias de interés, o para transposición replicativa, se suelen emplear Mini-Mus que carecen de los genes que codifican para funciones de encapsulamiento o empaquetamiento.
Normalmente no suelen ser tan fácil ya que muchas veces estos Mini-Mus no suelen ser estables debido a su pobre genoma, y deben de ir acompañados de otros plásmidos para estabilizar su inserción (y por la tanto la de nuestro gen de interés en el organismo). Hay diferentes modos de llevar esto a cabo, pero uno de los más empleados, haces uso de un plásmido integrativo que consiste en el Mini-Mu(LR) como primer componente y un plásmido de refuerzo que posee los genes inducibles MuA y MuB, que como contrate originan un replicón inestable, aunque este puede ser eliminado fácilmente de la célula.
Otro mecanismo empleado suelen ser un elemento génico denominado E, en trans, que hace que el Mini-Mu pase de ser (L/R) y sólo tener los extremos terminales genómicos, a ser (LER) y poseer además de estos extremos una secuencia denominada E que influye positivamente en la transposición. De hecho en comparaciones de efectividad en la transposición entre los Mini-Mu (LR) y los (LER) se muestra un aumento de dos órdenes de magnitud en la eficacia de transposición de los Mini-Mu(LER).
Ahora una vez ya construido el vehículo, podemos insertar cualquier cosa en el ya sea un marcados y nuestro gen de interés, o simplemente un gen mutado con la finalidad de knoquear al wildtipe. A continuación se muestra un cuadro con las múltiples aplicaciones que ha tenido este fago en E.coli:
Todas estas inserciones se han hecho mediante un componente Mini-Mu doble, ya sea uno de los antes mencionados u otros, los cuales fueron insertados en el cromosoma de E. coli, con la finalidad de crear nuevas cepas para la investigación y la ingeniería metabólica (especialmente en la producción de aminoácidos).
La expresión de los insertos mediante los Mini-Mu, normalmente dependen del número de copias que poseen en el cromosoma bacteriano. Incluso se puede determinar su número de copias mediante el uso de la reacción en cadena de la polimerasa inversa.
En la próxima entrada trataremos de cómo podemos emplear el fago Mu, para la modificación y el análisis funcional de otros genomas vriales